产品介绍
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
试剂盒内容
BSA 组分表
| 组分名称 |
规格 |
| 试剂A |
100ml |
| 试剂B |
3ml |
| BSA标准品①(2000μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品②(1500μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品③(1000μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品④(750μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品⑤(500μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品⑥(250μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品⑦(125μg/ml） |
1.5ml |
| BSA标准品⑧(0μg/ml） |
1.5ml（空白孔） |
使用说明
一.配制BCA工作液
A.计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
注意：微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。
B.配制BCA工作液：50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B（A:B=50:1），充分混匀。
注意：BCA试剂B加入BCA试剂A中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内，室温条件24h稳定。
二.微孔板法
1.分别取BSA标准品①-⑧ 各25μL加到 96孔板各孔中( BSA标准品使用前须充分摇匀)。
2.用1×PBS或0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释)，不同稀释度的待测样品各取25μl依次加入到96 孔板的样品孔中。。
3.每孔加入200μl BCA工作液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min，冷却到室温。
注意：也可以室温放置2h，或60℃放置30min。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。
4.用酶标仪测定每个待测样品和BSA标准品在A562处的吸光值，或540~590 nm之间的其它波长的吸光值，注意要减去空白孔(BSA标准品⑧＋BCA工作液)的吸光值。
5.绘制标准曲线，计算待测样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
注意事项
1.低温或长期保存，若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生，请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解，如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
2.不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。
3.每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。
4.当试剂A和B混合时会有浑浊，混匀后就会消失。
5.需准备37℃温箱、酶标仪，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。酶标仪需与96孔酶标板配套使用。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
6.使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
文献引用格式
即用型BCA蛋白浓度测定试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#AR0051)
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