浓缩型SABC-POD(兔IgG)试剂盒

1/5盒(可以做100-200张切片)/420元
2/5盒(可以做200-400张切片)/850元
1盒(可以做500-1000张切片)/1400元

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链酶亲和素是一种从链酶菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链酶亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzymeComplex,故命名为SABC。根据研究，每个SABC复合物由一百多个过氧化物酶分子和几十个链酶亲和素分子构成。由于有大量的酶分子组成放大系统，因此SABC有很高的敏感性。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

试剂盒组分	体积	稀释比	用途	保存条件
山羊血清封闭液	1ml/2ml/5ml	1:10	用于组织切片的封闭	4℃可保存一年，应避免冷冻。
生物素标记山羊抗兔 IgG	0.1ml/0.2ml/0.5ml	1:100	生物素标记山羊抗兔 IgG
SABC	0.1ml/0.2ml/0.5ml	1:100	链霉亲和素-过氧化物酶复合物
注：另有三个滴瓶供稀释试剂用。稀释试剂推荐用0.02M PBS。

1. 粘片剂 APES（AR0001）或 POLY-L-LYSINE（AR0003）。
2. EDTA修复液（AR0023）。
3. 0.02M PBS（pH7.2-7.6）配法（AR0030）：1000ml蒸馏水中加氯化钠9g, Na2HPO4·12H2O7g, NaH2PO4·2H2O 0.5g。
4. 0.01M枸橼酸盐缓冲液（AR0024）：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。
5. DAB显色试剂盒（AR1027）。

A.石蜡片热修复染色步骤：
1. 石蜡切片，常规脱蜡至水。
2. 3% H2O2 去离子水室温孵育 5-10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(AR0030)冲洗，5min×3 次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 热修复抗原：将切片浸入到 EDTA 修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5-10min 再修复 1-2 次，冷却。
5. 滴加山羊血清封闭液，37℃孵育 30min，甩干，勿洗。
6. 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育 1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗，5min×3 次。
7. 滴加生物素标记山羊抗兔 IgG ，37℃孵育 30min 。PBS 冲洗，5min×3 次。
8. 滴加 SABC，37℃孵育 30min。PBS 冲洗，5min×3 次。
9. 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB (AR1027)或 AEC (AR1020) 。自来水充分冲洗。
10. 苏木素(AR0005)复染，染色时间为 0.5-2min。脱水，透明。
11. 选用中性树胶，水溶性封片剂(AR1018)或其他适当的封片剂封片。
B.石蜡片酶消化染色步骤：
将 A 程序的第 4 步：滴加酶消化液室温 5-10min。酶修复可选用复合修复液(AR0022) 、胰蛋白酶(AR1007) 、 胃蛋白酶(AR1008)消化组织。蒸馏水洗 2min×3 次。
C.石蜡切片酶不消化/修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略 A 程序中的第 4 步即可。
D.细胞片的染色步骤：
1.爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的 24 孔板中培养 1-2 天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
2. 固定。4℃预冷 4%多聚甲醛固定 20min 或冷丙酮固定 10min。蒸馏水洗2min×3 次。
3. 3% H2O2 去离子水室温孵育 5-10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS(AR0030)冲洗，5min×3 次。
4.打孔。0.25% Triton X-100 处理细胞 15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
5.酶消化处理室温 5-10min。酶消化可选用复合修复液(AR0022) 、胰蛋白酶(AR1007)、胃蛋白酶(AR1008) 。蒸馏水洗 2min×3 次。
6.滴加山羊血清封闭液，37℃孵育 30min，甩干，勿洗。
7.滴加适当稀释的一抗，37℃孵育 1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗，5min×3 次。
8.滴加生物素标记山羊抗兔 IgG，37℃孵育 30min 。PBS 冲洗，5min×3 次。
9.滴加 SABC，37℃孵育 30min 。PBS 冲洗，5min×3 次。
10.显色：镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB (AR1027)或 AEC (AR1020) 。自来水充分冲洗。
11.苏木素(AR0005)复染，染色时间为 0.5-2min。脱水，透明。
12.选用中性树胶，水溶性封片剂(AR1018)或其他适当的封片剂封片。

1.如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。
2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。

浓缩型SABC-POD(兔IgG)试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SA2002)