SDS裂解液

100ml/198

-20℃保存，一年有效。

使用说明： 对于培养细胞样品： 1.完全融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 2.对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP， 初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 注意：低温裂解的时候，裂解液中的SDS会析出，此时可以不做任何处理，待裂解时间快到了的时候，可以预留1-2分钟，将裂解液置于室温，等SDS完全溶解后再离心。 3.充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200微升裂解液。 对于组织样品： 1.把组织剪切成细小的碎片。 2.完全融解SDS裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。 3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。) 4.用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 注意：低温裂解的时候，裂解液中的SDS会析出，此时可以不做任何处理，待裂解时间快到了的时候，可以预留1-2分钟，将裂解液置于室温，等SDS完全溶解后再离心。 5.充分裂解后，将裂解液转入离心管，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。

SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western，ChIP等

50mM Tris (PH 8.1)，1% SDS，以及焦磷酸钠，β-甘油磷酸，正钒酸钠，氟化钠，EDTA，leupeptin

1.为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 3.需自备PMSF。 4.用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到的样品的蛋白浓度。 5.裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。若透明胶状物不能离心下来，则可以通过超声处理该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。

SDS裂解液 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#AR0095)