NP-40(裂解液/IP细胞裂解液)

100ml/198

IP细胞裂解液是一种比较温和的裂解液，温和配方有助于维持蛋白复合物及蛋白完整构象。IP细胞裂解液的主要成分为25mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40等。

4℃保存，一年有效。

使用方法：
取适量裂解液，在使用前数分钟内加入酶抑制剂。
对于细胞样品：
1.对于贴壁细胞，培养好的细胞吸去培养液后，加入预冷的PBS洗两次，加入适量提取试剂（试剂用量见下表格），用移液器吹打数下，把细胞吹散，冰上裂解10分钟。充分裂解后，裂解物移入预冷的微型离心管中，4℃，13000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。
板规格/表面积 试剂用量
100×100mm 500~1000ul
100×60mm 250~500ul
6-well plate 200~400ul per well
24-well plate 100~200ul per well
2.对于悬浮细胞，离心（1000g，5min）收集细胞，用预冷的PBS洗两次，离心（1000g，5min），收集细胞，加入适量裂解液，每100万个细胞加入100ul的裂解液。用移液器吹打数下，把细胞吹散，冰上裂解10分钟，期间拿出涡旋震荡数次，充分裂解细胞。充分裂解后，4℃，13000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。
对于组织样品：
1.把组织剪切成细小的碎片。
2.按照每0.1g组织加入1ml裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
3.用玻璃匀浆器匀浆，冰上裂解10分钟，直至充分裂解。
4.充分裂解后，13000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2.裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂干扰，不建议用Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
3.本试剂能提取大部分经常研究的蛋白质抗原，但对于大分子多聚抗原则无效。
4.该裂解液不包含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，如果需要，需自行准备。

NP-40(裂解液/IP细胞裂解液) (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#AR0107)