Bradford蛋白浓度测定试剂盒

kit/90

Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液（考马斯亮蓝G-250染料）与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。

Bradford 染色液 100ml
BSA 标准品 20ml（2mg/ml）

4℃保存，一年有效。

使用说明：
一、配制BSA标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考下表。
Vial 稀释液体积(μl) 2mg/ml BSA体积(μl) BSA终浓度(μg/ml)
A 0 100 2000
B 25 75 1500
C 50 50 1000
D 125 75 750
E 150 50 500
F 350 50 250
G 375 25 125
H 395 5 25
I 400 0 0=Blank（空白孔）
二、检测方法:
A. 试管法检测（线性范围：100-1500μg/ml）
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2.加入1ml Bradford染色液，混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定595nm处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X=蛋白浓度μg/ml；Y=最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B. 标准微孔板检测（线性范围：100-1500μg/ml）
1.各取5μl各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
2.每孔加入250μl Bradford染色液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4.根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数），绘制标准曲线（X=蛋白浓度μg/ml；Y=最终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。注意：由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μl标准品/待检样本，和250μl Bradford染色液来进行检测。

注意事项：
1. 各取样操作应准确无误。
2. 在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。
3. 加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4. Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。
5. Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6. 每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7. Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会 受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015% 等。

Bradford蛋白浓度测定试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#AR0145)