TUNEL细胞凋亡两步法检测试剂盒-AP

100T/5900

编号	名称	规格
1	标记缓冲液(Labeling Buffer)	5ml
2	末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT,×20)	100μl
3	BIO-dUTP(×20)	100μl
4	封闭液(Blocking Reagent)	20ml
5	SABC-AP(×100)	100μl
6	Proteinase K(×200)	250μl
7	SABC稀释液	20ml
8	BCIP/NBT显色剂(×20)	1ml
9	阳性对照片	2张

1. 多聚赖氨酸或APES(博士德公司有售)。
2. 0.01M TBS,PH7.5（AR0031博士德公司有售)(配法:1L双蒸馏水中加入8.5克氯化钠,1.2克Tris 和0.45—0.5ml纯乙酸)。
3. 0.01M TBS,pH9.0--9.5(配法:1L 双蒸馏水中加入 8.5 克氯化钠,1.2 克 Tris )。
4. 核固红—复染用(博士德公司有售AR0008)。
5. 水溶性封片剂(博士德公司有售AR1018)。

操作步骤:
1.样品处理:
(1)玻片预先用多聚赖氨酸或APES进行处理。
(2)细胞涂片和冰冻切片：最重要的是及时固定。用4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)室温下固定30—60分钟。0.01M PBS洗2分钟×2次。蒸馏水洗涤2分钟×2次。
(3)组织：有条件时应及时固定。常规4%多聚甲醛/0.01M PBS(PH7.0---7.6)或10%中性缓冲福尔马林固定4小时以上，石蜡包埋。切片常规脱蜡入水（脱蜡务必干净）。
2.标本片加0.01M TBS 1:200新鲜稀释Proteinase K 37℃消化1—15分钟,0.01M TBS洗2分钟×3次。(细胞涂片和冰冻切片一般不消化或消化10—60秒钟。新鲜石蜡切片消化5-10分钟。陈旧石蜡切片消化10-15分钟)。
3.标本片加标记缓冲液(Labeling Buffer) 20μl/片,以保持切片湿润。按每张切片取TdT 和BIO-d-UTP各1μl，加入18μl标记缓冲液中，混匀。甩去切片上多余液体后加标记液，20μl/片。置样品于湿盒中，37℃标记2小时。
4. 0.01M TBS洗2分钟×3次。
5. 加封闭液50μl/片，室温30分钟，甩掉封闭液，不洗。
6. 用SABC稀释液1：100稀释SABC-AP：取 1ml 抗体稀释液加 SABC-AP 10μl，混匀后 50μl/片加 至切片。37℃反应 60 分钟。0.01M TBS（pH7.5）洗 5 分钟×4 次。
7. BCIP/NBT 显色：BCIP/NBT（×20）按 1：20 的比例用 0.01M TBS (pH9.0-9.5)稀释，混匀。显色 液加至标本上。避光显色 20-30 分钟，若无背景出现则可继续显色。充分水洗。
8. 必要时可用核固红等复染。水溶性封片剂（博士德有售）封片，也可简单地用甘油封片。镜检

-20℃保存，一年有效。

1. 试剂盒严格-20℃存放。
2. 初用时如试管底部无可见的试剂，在离心机离心 5 分钟，使试剂沉至管底。
3. 检测过程中切勿使样品干涸。

TUNEL细胞凋亡两步法检测试剂盒-AP (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#MK1014-100)