浓缩型SABC-CY3(POD)(大鼠IgG)试剂盒

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SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链霉亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzymeComplex，故命名为SABC。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。SABC-Cy3代表了新一代的免疫荧光方法。Cy3比传统上的荧光更具有亲水性，因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合，从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。CY3在554nm激化，在568-574nm发射荧光，呈鲜红色。免疫组化双显色试剂盒采用CY3+过氧化物酶POD标记的链酶亲和素（SABC-CY3+POD），用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。

试剂盒组分	体积	稀释比	用途	保存条件
正常兔血清封闭液	1ml/2ml/5ml	1:10	用于组织切片的封闭	4℃可保存一年，应避免冷冻。
生物素化兔抗大鼠 IgG	0.1ml/0.2ml/0.5ml	1:100	生物素化兔抗大鼠 IgG
SABC-CY3	0.1ml/0.2ml/0.5ml	1:100	SABC-CY3 荧光染料
SABC-POD	0.1ml/0.2ml/0.5ml	1:100	链霉亲和素-过氧化物酶复合物
注：另有四个滴瓶供稀释试剂用。

1．粘片剂APES或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。
2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml蒸馏水中加氯化钠8.5g,Na2HPO42.8g,NaH2PO40.4g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
3．0.01M枸橼酸盐缓冲液：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g,枸橼酸(C6H8O7·H2O)0.4g。
4．DAB显色试剂盒（博士德公司有售）。

免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。

A.石蜡切片微波修复抗原染色程序:
1.载玻片防脱片剂处理：可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分钟以使切片紧密粘附。
2.切片脱蜡至水。
3.必要时根据抗原情况对切片进行微波修复抗原或酶消化处理。蒸馏水洗2分钟×3次。
4.滴加0.01MPBS1：10稀释的正常血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。
5.滴加0.01MPBS适当稀释的一抗，20-37℃1~2小时或4℃过夜。0.01MPBS洗2分钟×3次。
6.滴加0.01MPBS1：100稀释的和一抗相对应的生物素化二抗，20-37℃30分钟。0.01MPBS洗2分钟×3次。
7.滴加0.01MPBS1：200-800稀释的DyLight488-SABC，20-37℃30分钟。0.01MPBS洗5分钟×4次。
8.水溶性封片剂封片。荧光显微镜观察。

血涂片，细胞和冰冻切片染色程序：
1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定60-90分钟。
3.必要时根据抗原情况对切片进行微波修复抗原或酶消化处理。蒸馏水洗2分钟×3次。
其余步骤和石蜡切片4-8步相同。

浓缩型SABC-CY3(POD)(大鼠IgG)试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SA1046)