即用型SABC-AP(小鼠/兔IgG)试剂盒

1/2盒(可以做80张左右的切片)/360元
1盒(可以做160张左右的切片)/690元

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，等电点pI=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。链霉亲和素用戊二醛方法偶联小牛肠中的碱性磷酸酶,特异性的和生物素分子结合，保证SABC具有高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便等优点。博士德采用独特方法生产的SABC不仅有很强的信号放大作用，而且非常稳定。

组分名称	规格	用途/用法	保存条件
5%BSA 封闭液	6ml/12ml	封闭液，即用型，直接滴加	4℃可保存一年，应避免冷冻。
二抗	6ml/12ml	生物素标记山羊抗小鼠/兔 IgG，即用型，直接滴加
SABC—AP	6ml/12ml	链酶亲和素—碱性磷酸酶，即用型，直接滴加
显色剂A(×20)	0.5ml/1ml	BCIP/NBT 显色剂A，需稀释20倍
显色剂B(×20)	0.5ml/1ml	BCIP/NBT 显色剂B，需稀释20倍
中性核固红	6ml/12ml	复染，即用型，直接滴加
水溶性封片剂	6ml/12ml	封片剂，即用型，直接滴加封片

1．粘片剂APES或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。
2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml蒸馏水中加氯化钠8.5g,Na2HPO42.8g,NaH2PO40.4g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
3．0.01M枸橼酸盐缓冲液：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g,枸橼酸(C6H8O7·H2O)0.4g。

免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。
A.石蜡切片热修复抗原染色程序:
1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。
2.切片常规脱蜡至水。
3.30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。
5.滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。
6.滴加适当稀释的一抗（小鼠或兔IgG），20-37℃1~2小时左右。也可4℃过夜。0.01MTBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
7.滴加生物素化山羊抗小鼠或兔IgG,20-37℃20分钟。0.01MTBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。
8.滴加试剂SABC-AP,20-37℃20分钟。0.01MTBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。
9.显色:BCIP/NBT用0.01MTBS（pH9.0-9.5）按1：20的比例稀释，混匀后加至切片。20-37℃显色10-30分钟，镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
10.核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片（水溶性封片剂应加温至60℃左右）。显微镜观察。
B.石蜡切片酶消化程序:
以下面的步骤代替A程序中的第4步:滴加复合消化液(博士德有售)5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C.石蜡切片不消化/不修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A程序中的第4步即可。
D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序
1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30分钟。
3.30%H2O21份+纯甲醇50份混合,室温浸泡30分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。其余步骤和石蜡切片5-10步相同。如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10步相同。

1.如果染色背景过高，在SABC反应之后，BCIP/NBT显色之前,用加有0.01—0.02%TWEEN20的PBS洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。
2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。

即用型SABC-AP(小鼠/兔IgG)试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SA1050)