浓缩型SABC-POD(小鼠/兔IgG)试剂盒

1/4盒(可以做400张左右的切片)/480元
1/2盒(可以做800张左右的切片)/850元
1盒(可以做1600张左右的切片)/1600元

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链酶亲和素是一种从链酶菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。等电点接近中性，这些特点使链酶亲和素的非特异吸附很低。因该方法的中心是StreptAvidin-Biotin-enzymeComplex,故命名为SABC。根据研究，每个SABC复合物由一百多个过氧化物酶分子和几十个链酶亲和素分子构成。由于有大量的酶分子组成放大系统，因此SABC有很高的敏感性。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

试剂盒组分	体积	稀释比	用途	保存条件
山羊血清封闭液	2.5ml/5ml/10ml	1:10	用于组织切片的封闭	4℃可保存一年，应避免冷冻。
生物素标记山羊抗小鼠 IgG 和生物素标记山羊抗兔 IgG	0.25ml/0.5ml/1ml	1:100	生物素标记山羊抗小鼠 IgG 和生物素标记山羊抗兔 IgG
SABC	0.25ml/0.5ml/1ml	1:100	链霉亲和素-过氧化物酶复合物
注：另有四个滴瓶供稀释试剂用。稀释液可选用 TBS 或 PBS 缓冲液

1．粘片剂APES或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。
2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml蒸馏水中加氯化钠8.5g,Na2HPO42.8g,NaH2PO40.4g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
3．0.01M枸橼酸盐缓冲液：1000ml蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g,枸橼酸(C6H8O7·H2O)0.4g。
4．DAB显色试剂盒（博士德公司有售）。

免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。
A.石蜡切片微波修复抗原染色程序:
1．载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。
2．切片脱蜡至水。
3．蒸馏水新鲜配置3%H2O2,室温10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗2分钟×3次。
4．微波修复抗原:将切片浸入0.01M,PH6.0柠檬酸盐缓冲液中,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，循环2-3次。冷却后进行下一步。
5．滴加用0.02MPBS1：10稀释正常血清封闭液（二抗同种动物来源血清）,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。
6．滴加适当稀释的一抗（大鼠或山羊，人IgG），20-37℃1~2小时或4℃过夜。0.02MPBS洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
7．配制二抗工作液：取1ml0.02MPBS或TBS（PH7.2-7.6）加入生物素化兔抗山羊IgG(或兔抗大鼠IgG，或兔抗人IgG)10μι,混匀后加至切片。20-37℃20分钟。0.02MPBS洗2分钟×3次。
8．配制SABC工作液：取1ml0.02MPBS或TBS（PH7.2-7.6）加入试剂SABC10μι,混匀后加至切片。20-37℃20分钟。0.02MPBS洗5分钟×4次。
9．DAB显色:按100ml0.02MPBS或TBS中加入最终浓度为25-50mgDAB,0.03%的H2O2。或使用DAB显色试剂盒(AR1022)。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各1滴,混匀后加至切片。室温显色,镜下控制反应时间，一般5-30分钟。蒸馏水洗涤。
10．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。观察。
B.石蜡切片酶消化程序:
以下面的步骤代替A程序中的第4步:滴加复合消化液(博士德有售)5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C.石蜡切片不消化/不修复程序:
对于不需要微波修复或消化的抗原,省略A程序中的第4步即可。
D.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序：
1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定60-90分钟。
3.30%H2O21份+纯甲醇50份混合,室温浸泡30分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2次。其余步骤和石蜡切片5-10步相同。如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片4-10步相同。

1.如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。
2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。

浓缩型SABC-POD(小鼠/兔IgG)试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SA2010)