使用说明
1. 执行常规SDS－PAGE、转膜和Western Blot步骤。
2. 膜的封闭:用TBS-T液洗涤印迹膜10minX2。放入5%脱脂奶粉封闭液内，摇床震动，室温封闭1小时。
3. 一抗孵育: 去除封闭液，并加入稀释好的一抗，用摇床震动，室温孵育2h或4°C孵育过夜。
注意：最好使用推荐的一抗稀释比例，稀释一抗使用封闭液稀释。
4. 用4-6倍TBS-T洗涤印迹膜，10minX3。增加洗液量，和/或洗膜的次数可降低背景。
注意：洗涤之前，用TBS-T洗液将印迹膜进行简单的漂洗，将会增加洗膜的效果。
5. 二抗孵育：将一抗孵育后的印迹膜放入适当稀释的HRP标记的二抗中孵育，摇床震动，室温孵育2小时。
注意：最好使用推荐的HRP标记二抗的稀释比例，稀释二抗使用封闭液稀释。
6. 重复第4步，以去除非特异性HRP标记二抗的结合。
注意：与HRP标记二抗孵育后，必须彻底地清洗印迹膜。
7. 制备工作液：按每1 ml蒸馏水加A液和B液各50μι，混匀组成工作液即可使用。用量以充分覆盖印迹膜为基准。每10 cm2膜需要大约1 ml工作液。
8. 将印迹膜有蛋白的一面朝上平整的铺在一张平板上，加上配好的发光底物工作液。
9. 将印迹膜与工作液孵育1-5min。
注意：孵育的时间可以在暗室里观察，以判断是否进行胶片曝光。
10. 将一洁净的保鲜膜或透明的玻璃纸平整的铺在孵育有工作液的印迹膜上，只要保鲜膜或透明的玻璃纸比较大可以不用吸除多余的工作液，轻轻赶出其间的气泡。
11. 在暗室中取一张X胶片小心置于膜上，曝光5秒至1分钟，立即显影定影。
注意：根据其发光的强度， 缩短或延长X片的曝光时间（对微弱信号，曝光时间可延长至数小时）,或者曝光一系列不同的时间后再显影定影挑选一张满意的。也可用合适的照相器材直接记录蛋白膜的化学发光图像。
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