过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒

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SH3001

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过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒

规格/价格

96T|380元

产品介绍

过氧化氢酶（CAT，EC 1.11.1.6）是一种存在于所有好氧生物（包括植物、动物和微生物）体内的关键抗氧化酶。它的核心功能是催化过氧化氢（H₂O₂）分解为水和氧气，从而保护细胞免受氧化损伤。细胞在正常代谢（如光合作用、呼吸作用）以及逆境胁迫下会持续产生H₂O₂。CAT通过及时清除H₂O₂，防止其通过芬顿反应（Fenton reaction）生成毒性更强的羟基自由基（·OH），从而保护脂质膜、蛋白质和DNA免受氧化损伤。
对于一定量的H₂O₂，过氧化氢酶可以催化H₂O₂产生水和氧气，剩余的H₂O₂与一种显色底物反应，产生红色产物，在510nm处有最大吸收峰。通过计算H₂O₂减少量来计算样本中过氧化氢酶的活力。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体 100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体 25mL×1瓶	4℃保存
试剂二	液体 200μL×1支	4℃保存	用前甩几下或离心使试剂落入底部，取 20μL 至 2mL EP 管中，加入 1.31mL 蒸馏水混匀备用。
试剂三	液体 50mL×1瓶	4℃保存
试剂四	液体 1mL×1瓶	4℃保存
试剂五	液体 1mL×1瓶	4℃保存
标准品	液体 200μL×1支	4℃保存

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备

① 组织样本：
称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，在4℃、12000g条件下离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5～10的比例进行提取。

② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500～1000：1的比例进行提取，建议500万细菌或细胞加入1mL提取液。
超声波破碎细菌或细胞，超声条件为：冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次。随后在4℃、12000g条件下离心10min，取上清，置冰上待测。

③ 液体样本：
直接检测；若样本浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm。

② 试剂二先按照试剂配制要求配制好，再进行以下操作。

③ 空白管检测（仅做一次）：
依次加入40μL试剂一、10μL试剂二和450μL试剂三，立即混匀后取10μL，立即按照第⑥步显色反应依次加样检测，测得的吸光值即为A_空白。

④ 由于反应时长为5min，若一次性待检样本较多，建议分批检测。

⑤ 在EP管中依次加入以下试剂：

试剂名称（μL）	测定管
样本	10
试剂一	30
试剂二	10

混匀，室温25℃准确反应5min。观察是否有气泡产生，酶活性越大，产生的气泡越多。

试剂名称（μL）	测定管
试剂三	450

混匀后，立即取10μL混合液进行第⑥步测试。若混合液浑浊，则需在4℃、8000g条件下离心10min，取上清液进行检测。

⑥ 显色反应：
可根据使用量，将试剂一、试剂四和试剂五按照170μL：10μL：10μL的比例预先混合。

试剂名称（μL）	测定管
混合液	10
试剂一	170
试剂四	10
试剂五	10

混匀，室温25℃反应1min，于510nm处测定吸光值A，计算公式如下：
ΔA=A_空白-A_测定

【注】使用本试剂盒时，当ΔA过大或过小时，建议将样本进行稀释或增加样本量后重新测试。

文献引用格式

过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3001）

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