超氧化物歧化酶（SOD）活性测定试剂盒

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SH3002

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超氧化物歧化酶（SOD）活性测定试剂盒

规格/价格

96T|680元

产品介绍

超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD，EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物体内重要的抗氧化酶。SOD能够催化超氧阴离子自由基（O₂⁻·）发生歧化反应，生成H₂O₂和O₂，在机体氧化与抗氧化平衡中起关键作用。
本试剂盒采用WST-8显色法：黄嘌呤氧化酶（XO）催化黄嘌呤氧化产生超氧阴离子自由基（O₂⁻·），WST-8与O₂⁻·反应生成水溶性的橙黄色甲臜产物，该产物在450 nm波长处有特征吸收峰。SOD可清除O₂⁻·，从而抑制甲臜的形成。反应液颜色越深，说明SOD活性越低；颜色越浅，说明SOD活性越高。通过测定450 nm处吸光度的变化，计算SOD对O₂⁻·的抑制率，即可得出SOD酶活性。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体 100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体 15mL×1瓶	4℃保存
试剂二	液体 1mL×1支	4℃保存
试剂三	液体 1.1mL×1支	4℃保存
试剂四	液体 200μL×1支	4℃保存	若凝固，可在 25℃ 水浴温育片刻至全部融解，分装后 -20℃ 保存。临用时取 20μL 至一个新 EP 管中，加入 480μL 试剂一稀释待用。

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：
称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，在4℃、12000g条件下离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5～10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500～1000：1的比例进行提取（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液）。超声波破碎细菌或细胞，超声条件为：冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次；随后在4℃、12000g条件下离心10min，取上清，置冰上待测。

③液体样本：
直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

② 测试前将试剂一、试剂三和试剂四于25℃水浴5min以上。

③ 用排枪操作，以减少各孔间因加入试剂时间先后导致的误差。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	样本管	样本对照管（可选做）	空白管1（仅做一次）	空白管2（仅做一次）
试剂一	140	140	140	140
试剂二	10		10
蒸馏水		10	10	30
样本	20	20
试剂三	10	10	10	10
试剂四	20	20	20	20

充分混匀，室温（25℃）避光静置30min（准确计时）后，在450nm处测定各管吸光值A。

【注】
1、若样本数量较多，测定前可将试剂一、试剂三和试剂四按照140μL：10μL：20μL的比例混合成混合液（需依据每次检测的样本数量混合相应的试剂量），每孔务必在最后一步加入170μL该混合液。

2、样本对照管：提取后的样本颜色较深，如呈棕褐色或黄色，或A_对照管值＞0.1时，可设置此管；否则抑制率会偏低，即SOD活性偏低。若为相同样本，可设置一组样本对照管；若每个样本均设置对照管，则该试剂盒可检测的样本数量由原来的96个变为48个。

3、若样本管数值较低，可能的原因为：
①试剂二或试剂四未现配现用；
②未按照规定顺序加入试剂；
③反应温度未达到室温（25℃）。

文献引用格式

超氧化物歧化酶（SOD）活性测定试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3002）

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