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蛋白质羰基含量检测试剂盒

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SH3005

  • 96T ¥680
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产品名称
蛋白质羰基含量检测试剂盒
规格/价格
96T|680元
产品介绍
蛋白质羰基(Protein Carbonyl,PCO)是多种氨基酸(赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸等)在蛋白质氧化修饰过程中的早期产物,其含量高低是衡量蛋白质氧化损伤程度的主要指标。氧化应激时,蛋白质侧链被氧化生成羰基衍生物,因此羰基水平可反映机体氧化损伤状态。
本试剂盒采用2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法:在酸性条件下,DNPH与蛋白质羰基反应生成红色的2,4-二硝基苯腙沉淀。该沉淀经有机溶剂反复洗涤去除游离DNPH后,用盐酸胍溶液溶解,在370 nm波长处有特征吸收峰。在特定浓度范围内,吸光度值与蛋白质羰基含量呈正比。
试剂盒内容
试剂名称规格保存条件备注
提取液液体 100mL×1瓶4℃保存
试剂一液体 1mL×1瓶4℃保存
试剂二粉剂×1瓶4℃保存用前甩几下使试剂落入底部,加入 3mL 浓盐酸完全溶解后(可超声溶解),再缓慢加入 15mL 蒸馏水,溶解混匀备用。
试剂三液体 20mL×1瓶4℃保存
试剂四自备4℃保存无水乙醇∶乙酸乙酯=1∶1 比例配制(如 40mL 无水乙醇和 40mL 乙酸乙酯混匀备用)。
试剂五液体 40mL×1瓶4℃保存
使用说明
正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定,了解本批样本情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、样本制备:

①组织样本:
称取约0.1g组织(水分充足的样本可取0.5g),加入1mL提取液,进行冰浴匀浆,在4℃、12000g条件下离心10min,上清备用。将上清液与试剂一按照9:1的比例混合(如0.45mL上清液加入0.05mL试剂一),室温放置10min后,在室温、8000g条件下离心10min,取上清待测。

【注】若增加样本量,可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例进行提取(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液)。超声波破碎细菌或细胞,超声条件为:冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次;随后在4℃、12000g条件下离心10min,上清备用。将上清液与试剂一按照9:1的比例混合(如0.45mL上清液加入0.05mL试剂一),室温放置10min后,在室温、12000g条件下离心10min,取上清待测。

③液体样本:
直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

2、上机检测

酶标仪预热30min以上,调节波长至370nm。

②在EP管中依次加入:

试剂名称(μL) 测定管 空白管(仅做一次)
样本 80
蒸馏水 80
试剂二 160 160

混匀,37℃避光反应30min。

试剂名称(μL) 测定管 空白管(仅做一次)
试剂三 200 200

混匀,在4℃、8000g条件下离心10min,弃上清,保留沉淀。

试剂名称(μL) 测定管 空白管(仅做一次)
试剂四(自备) 400 400

涡旋混匀,在4℃、8000g条件下离心10min,弃上清,保留沉淀。
此步骤(加入试剂四)需重复操作2次。

试剂名称(μL) 测定管 空白管(仅做一次)
试剂五 400 400

涡旋混匀,37℃孵育15min,尽量使沉淀充分溶解;随后在4℃、8000g条件下离心10min,取200μL上清液加入96孔板中,于370nm处测定吸光值。

ΔA=A测定管-A空白管
文献引用格式
蛋白质羰基含量检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3005)

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