蛋白质羰基含量检测试剂盒
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SH3005

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蛋白质羰基含量检测试剂盒

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96T|680元

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蛋白质羰基（Protein Carbonyl，PCO）是多种氨基酸（赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸等）在蛋白质氧化修饰过程中的早期产物，其含量高低是衡量蛋白质氧化损伤程度的主要指标。氧化应激时，蛋白质侧链被氧化生成羰基衍生物，因此羰基水平可反映机体氧化损伤状态。
本试剂盒采用2,4-二硝基苯肼（DNPH）比色法：在酸性条件下，DNPH与蛋白质羰基反应生成红色的2,4-二硝基苯腙沉淀。该沉淀经有机溶剂反复洗涤去除游离DNPH后，用盐酸胍溶液溶解，在370 nm波长处有特征吸收峰。在特定浓度范围内，吸光度值与蛋白质羰基含量呈正比。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体1mL×1瓶	4℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	4℃避光保存	用前甩几下使试剂落入底部，加3ml的浓盐酸完全溶解后（可超声溶解），再缓慢加入15mL蒸馏水，溶解混匀备用。
试剂三	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂四	自备	4℃保存	无水乙醇：乙酸乙酯=1：1比例配制（如40mL的无水乙醇和40mL乙酸乙酯混匀备用。
试剂五	液体40mL×1瓶	4℃保存

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，上清备用；上清液与试剂一按照9：1比例混合（如0.45mL上清加0.05mL试剂一），室温放置10min后，8000g室温离心10min，取上清待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，上清备用；上清液与试剂一按照9：1比例混合（如0.45mL上清加0.05mL试剂一），室温放置10min后，12000g室温离心10min，取上清待测。

③液体样本：直接检测，若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至370nm。

②在EP管中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管	空白管（仅做一次）
样本	80
蒸馏水		80
试剂二	160	160
混匀，37℃避光反应30min
试剂三	200	200
混匀，4℃，8000g离心10min，弃上清，留沉淀
试剂四（自备）	400	400
涡旋混匀，4℃，8000g离心10min，弃上清，留沉淀此步骤（加试剂四这步）需做2次
试剂五	400	400
涡旋混匀，37℃孵育15min（尽量使沉淀溶解），4℃ 8000g离心10min，取上清200μL于96孔板中于370nm处测吸光值，ΔA=A测定管-A空白管

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蛋白质羰基含量检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3005）

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