谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒
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SH3006

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谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒

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96T|680元

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谷胱甘肽还原酶（Glutathione Reductase, GR，EC 1.8.1.7）是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一。GR催化NADPH还原氧化型谷胱甘肽（GSSG）生成还原型谷胱甘肽（GSH），有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
本试剂盒采用Ellman法，GR催化GSSG还原生成GSH，新生成的GSH与DTNB迅速反应生成黄色的2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）。通过测定412 nm处TNB吸光度的增加速率，即可计算GR的酶活性。当体系中GSSG过量时，GSH的生成速率（即TNB的生成速率）与GR活性呈线性正相关。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体120mL×1瓶	4℃保存
试剂一	粉剂1.2mg×1瓶	4℃保存	用前甩几下或4℃离心使试剂落入底部，再加1mL蒸馏水溶解。
试剂二	粉剂2mg×1瓶	4℃保存	用前甩几下或4℃离心使试剂落入底部，再加1mL蒸馏水溶解；溶解后-20℃保存2周。
试剂三	液体1mL×1瓶	4℃避光保存	出现固体时可以25℃水浴5min，使固体完全溶解呈液体状态。

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清待测。

③液体样本：直接检测，若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，设置温度在25℃，调节波长至412nm。

②所有试剂在使用前解冻至室温或25℃水浴锅温育10min。

③试剂一和提取液和试剂三可按照10:150:10比例配成混合液（该混合液配多少用多少，现配现用，一枪加170μL该混合液）；可先加样本，再加试剂二（该试剂务必单独加），最后加现配现用的混合液。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管
试剂一	10
提取液	150
样本	20
试剂二	10
试剂三	10
立即混匀，在412nm波长下30秒时读取A1，室温（25℃）条件下孵育10min后再读取A2；ΔA=A2-A1。

文献引用格式

谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3006）

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