谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒

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SH3006

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谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒

规格/价格

96T|380元

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谷胱甘肽还原酶（Glutathione Reductase, GR，EC 1.8.1.7）是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一。GR催化NADPH还原氧化型谷胱甘肽（GSSG）生成还原型谷胱甘肽（GSH），有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
本试剂盒采用Ellman法，GR催化GSSG还原生成GSH，新生成的GSH与DTNB迅速反应生成黄色的2-硝基-5-巯基苯甲酸（TNB）。通过测定412 nm处TNB吸光度的增加速率，即可计算GR的酶活性。当体系中GSSG过量时，GSH的生成速率（即TNB的生成速率）与GR活性呈线性正相关。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体 120mL×1瓶	4℃保存
试剂一	粉剂 1.2mg×1瓶	4℃保存	用前甩几下或 4℃ 离心使试剂落入底部，再加入 1mL 蒸馏水溶解。
试剂二	粉剂 2mg×1瓶	4℃保存	用前甩几下或 4℃ 离心使试剂落入底部，再加入 1mL 蒸馏水溶解；溶解后 -20℃ 保存 2 周。
试剂三	液体 1mL×1瓶	4℃保存	出现固体时，可于 25℃ 水浴 5min，使固体完全溶解并呈液体状态。

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：
称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，在4℃、12000g条件下离心10min，取上清待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5～10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500～1000：1的比例进行提取（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液）。超声波破碎细菌或细胞，超声条件为：冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次；随后在4℃、12000g条件下离心10min，取上清待测。

③液体样本：
直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，设置温度为25℃，调节波长至412nm。

②所有试剂使用前解冻至室温，或置于25℃水浴锅中温育10min。

③试剂一、提取液和试剂三可按照10：150：10的比例配制成混合液。该混合液需现配现用，按实际用量配制，每孔一次性加入170μL混合液。加样顺序建议为：先加入样本，再单独加入试剂二，最后加入现配现用的混合液。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管
试剂一	10
提取液	150
样本	20
试剂二	10
试剂三	10

立即混匀，在412nm波长下于30s时读取吸光值A₁；随后在室温（25℃）条件下孵育10min，再读取吸光值A₂。

ΔA=A₂-A₁

文献引用格式

谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3006）

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