还原型抗坏血酸（AsA）含量检测试剂盒
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SH3011

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还原型抗坏血酸（AsA）含量检测试剂盒

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产品介绍

还原型抗坏血酸（Ascorbic Acid, AsA），又称维生素C，是生物体内重要的抗氧化剂和辅因子，在氧化还原反应代谢中起调节作用。抗坏血酸（AsA）与脱氢抗坏血酸（DHA）的比值（AsA/DHA）是反映细胞氧化状态的一个重要指标。
本试剂盒采用红菲咯啉比色法：还原型抗坏血酸（AsA）在酸性条件下将三价铁离子（Fe³⁺）还原为二价铁离子（Fe²⁺），Fe²⁺与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应生成红色络合物。该产物在534 nm波长处有特征吸收峰，在特定浓度范围内，吸光度值与抗坏血酸含量呈正比。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂二	液体0.2mL×1支	4℃保存	临用前取出0.024mL，再加4.976mL无水乙醇，混匀备用。
试剂三	粉体×1瓶	4℃保存	临用前甩几下使粉体落入底部，再加10mL无水乙醇混匀溶解（该试剂难溶，可超声溶解）。
试剂四	液体6mL×1瓶	4℃避光保存	溶液为淡黄色。
标准品	粉体×2支	4℃保存	临用前甩几下标准品管，使粉末落入底部，再加入1 mL试剂一混匀溶解，即得1mg/mL，再用试剂一稀释100倍（1：99）为0.01mg/ml溶液即为标准液（现配现用）。

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本取0.5g或更多），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清待测。

③液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至534nm。

②叶片类样本直接检测即可，果肉类样本一般需先稀释10倍再检测（可按照加样表加入20μL样本，试剂一增加为280μL）。

③在EP管中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管	标准管（仅做一次）	空白管（仅做一次）
样本	200
标准液		200
提取液			200
试剂一	100	100	100
无水乙醇	100	100	100
试剂二(稀释后）	50	50	50
试剂三	100	100	100
试剂四	50	50	50
混匀，于30℃反应60min后，于8000g室温离心5min后，立即取出200μL澄清液体至96孔板中，立即于534nm处读取各管吸光值A。

文献引用格式

还原型抗坏血酸（AsA）含量检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3011）

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