抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒
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SH3012

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抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒

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96T|680元

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抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate Peroxidase, APX，EC 1.11.1.11）是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物酶体和乙醛酸体等细胞器中。APX催化H₂O₂氧化抗坏血酸（AsA）生成单脱氢抗坏血酸（MDHA），是植物体内AsA的主要消耗者，在保护叶绿体免受氧化损伤中起重要作用。
抗坏血酸在290 nm波长处有特征吸收峰。在抗坏血酸过氧化物酶催化下，AsA被H₂O₂氧化为MDHA，随着酶促反应的进行，反应体系中AsA含量逐渐减少，290 nm处吸光度值随之下降。通过测定单位时间内吸光度的下降速率，即可计算抗坏血酸过氧化物酶的活性。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体120mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂二	粉剂×3支	4℃保存	临用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管底部，每支再加1.5mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存（可保存一个月），禁止反复冻融，解冻后可4℃保存并一周内使用完。
试剂三	液体1mL×1瓶	4℃保存

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本取0.5g或更多），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

【注】若样本颜色较深（如植物叶片），可引起起始值A1值较大如超过2，可在样本制备过程中增加除色素步骤：取约0.2g组织（水分充足样本可取1g），加入1mL 90%乙醇冰浴匀浆，12000g 4℃离心10min，弃掉色素较深的上清液；以上除色素步骤重复2次。最后向离心得到的沉淀中加入1mL提取液，混匀或再次冰浴匀浆，12000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清待测。

③液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至290nm，设置震荡时间5s。

②试剂一放25℃水浴中预热30min（如果实验室温度达到25℃以上，可以室温静置30min）。

③试剂一和二可按照150:20比例配成混合液（一枪加170μL该混合液，该混合液用多少配多少，现配现用），试剂三需单独加。

③在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管
样本	20
试剂一	150
试剂二	20
试剂三	10
混匀，在25℃条件下，在290nm处，分别于30s和5min30s读取吸光值A，相应记为A1和A2，ΔA=A1-A2

文献引用格式

抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3012）

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