正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定,了解本批样本情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、样本制备:
①组织样本:称取约0.1g组织(水分充足样本可取0.5g);或者称取约0.03g烘干样本(将样本在105℃下杀青3min,然后60℃烘干至恒重,粉碎,过40-60目筛,得到烘干样本),加入1.5mL 60%乙醇(若鲜样需研磨均质),60℃振荡提取2h,在25℃ 12000g离心10min,取上清,用提取液定容至1.5mL待测。
【注】若样本量较少,可同比例缩减样本量,如取0.02g干样,加入1mL的60%乙醇,60℃振荡提取2h。在25℃ 12000g离心10min,取上清,用提取液定容至1mL待测。
②液体样本:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测
①酶标仪预热30min以上,调节波长至760nm。
②对总酚含量较高的样本如茶叶,一般需要用蒸馏水稀释后再检测如稀释50倍,也可先选取2个样本做测试,找出适合本次检测样本的稀释倍数D。
③在96孔板中依次加入:
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 空白管(仅做一次) |
| 样本 | 10 | |
| 试剂一 | 50 | 50 |
| 混匀,25℃室温条件下,暗处静置3min |
| 试剂二 | 50 | 50 |
| 蒸馏水 | 90 | 100 |
| 混匀,25℃室温静置30min,于760nm处测吸光值,ΔA=A测定管-A空白管。 |