延胡索酸酶活性检测试剂盒
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SH3014

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延胡索酸酶活性检测试剂盒

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96T|380元

产品介绍

延胡索酸酶（Fumarase，FUM，EC 4.2.1.2），又称延胡索酸水化酶（Fumarate hydratase，FH），存在于线粒体中的延胡索酸酶是三羧酸循环中的关键酶之一，存在于胞质中的延胡索酸酶与氨基酸和富马酸酯的代谢关系密切。在人类中，该酶缺失会导致严重的健康问题，例如胎儿脑畸形，肌张力低下等。
延胡索酸酶催化延胡索酸（Fumarate）转化生成L-苹果酸（L-Malate），生成的L-苹果酸在苹果酸脱氢酶（Malate dehydrogenase, MDH）的作用下氧化生成草酰乙酸（Oxalacetic acid, OAA），同时NAD⁺被还原为NADH。生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，该产物在450 nm波长处有特征吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中延胡索酸酶的活性成正比。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
试剂一	液体100mL×1瓶	4℃保存
试剂二	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂三	液体1.3mL×1瓶	-20℃保存
试剂四	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂五	液体1mL×1瓶	4℃保存
试剂六	粉剂×2支	-20℃保存	临用前甩几下或4℃离心使粉剂落入试管底部，每支再加1mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存。
试剂七	液体1mL×1瓶	4℃保存
试剂八	液体1mL×1瓶	4℃保存
标准品	粉剂×1支	-20℃保存

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、线粒体样本制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持4℃低温环境）：

①称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10μL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转移至离心管后于4℃ 700g离心10min。

②弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃ 12000g离心10min。上清液即胞浆提取物，可用于测定胞浆中的延胡索酸酶（此步可选做），沉淀为线粒体。

③在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃ 12000g离心10min，取上清置于冰上用于线粒体中延胡索酸酶活性测定。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

②所有试剂解冻至室温（25℃）或于水浴锅（25℃）中孵育15-30min。

③试剂四、五、六、七、八可按照140:10:10:10:10比例配成混合液（一枪加180μL该混合液，该混合液用多少配多少，现配现用）。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管	标准品管
样本	20
标准品		20
试剂四	140	140
试剂五	10	10
试剂六	10	10
试剂七	10	10
试剂八	10	10
混匀，立即于450nm处读取各管吸光值A1，37℃孵育30min后读取A2，ΔA=A2-A1。

【注】：本操作流程适用于绝大多数常规样本检测，实验条件可根据实际样本状态适度微调；针对特殊类型样本，可联系我司提供优化建议。

文献引用格式

延胡索酸酶活性检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3014）

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