α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒
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SH3015

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α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒

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96T|680元

产品介绍

α-酮戊二酸脱氢酶（α-Ketoglutarate Dehydrogenase，α-KGDH，EC 1.2.4.2）广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中，是三羧酸循环调控关键酶之一，催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-酮戊二酸脱氢酶催化α-酮戊二酸、NAD⁺和辅酶A（CoA）生成琥珀酰CoA、CO₂和NADH。生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS的作用下将WST-8还原生成橙黄色的Formazan，该产物在450 nm波长处有特征吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中α-酮戊二酸脱氢酶的活性成正比。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂二	粉剂×2支	4℃保存	临用前甩几下或4℃离心使试剂落入底部，再加1mL蒸馏水溶解，分装后-20℃保存。
试剂三	粉剂×2支	4℃保存	临用前甩几下或4℃离心使试剂落入底部，再加1mL蒸馏水溶解，分装后-20℃保存。
试剂四	液体1mL×1瓶	4℃保存
标准品	粉剂×1支	4℃保存

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足样本可取0.5g），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5-10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

③液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

②所有试剂解冻至室温（25℃）或于水浴锅（25℃）中孵育15-30min。

③试剂一、二、三、四可按照150:10:10:10比例配成混合液（一枪加180μL该混合液，该混合液用多少配多少，现配现用）。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管	标准品管
样本	20
标准品		20
试剂一	150	150
试剂二	10	10
试剂三	10	10
试剂四	10	10
混匀，立即于450nm处读取各管吸光值A1，37℃孵育15min后读取A2，ΔA=A2-A1。

【注】：本操作流程适用于绝大多数常规样本检测，实验条件可根据实际样本状态适度微调；针对特殊类型样本，可联系我司提供优化建议。

文献引用格式

α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDH）活性检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3015）

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