总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒
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SH3020

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总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒

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96T|580元

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谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase, GPx，EC 1.11.1.9）代表一种具有过氧化物酶活性的酶家族，它可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。
本试剂盒采用DTNB比色法：GPx催化有机过氧化物（Cum-OOH）氧化GSH生成GSSG。反应剩余的GSH与DTNB反应，生成黄色的TNB。该产物在412 nm波长处有特征吸收峰，吸光度值与剩余GSH含量成正比，与GPx活性成反比。

试剂盒内容

试剂名称	规格	保存条件	备注
提取液	液体100mL×1瓶	4℃保存
试剂一	液体20mL×1瓶	4℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	4℃避光保存	用前甩几下或4℃离心使试剂落入底部，再加1mL蒸馏水溶解；溶解后-20℃保存2周。
试剂三	液体200uL×1瓶	4℃避光保存	取10uL试剂三加入5mL蒸馏水混匀，4℃保存。
试剂四	液体1.5mL×1瓶	4℃避光保存	出现固体时可以25℃水浴5min，使固体完全溶解呈液体状态。
标准品	粉剂×1瓶	4℃避光保存	若制作标曲，则用到该试剂

使用说明

正式实验前务必选取2-3个预期差异较大的样本做测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，在4℃ 12000g离心10min，取上清待测。

【注】若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心10min，取上清待测。

③液体样本：直接检测，若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测

①酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm。

②所有试剂在使用前解冻至室温或25℃水浴锅温育10min。

③用排枪操作，以减小各孔间因加入试剂时间先后导致的误差。

④在96孔板中依次加入：

试剂名称（μL）	测定管	空白管	空白管
试剂一	160	170	170
试剂二	10	10	10
样本	10
试剂三	10	10	10
25℃条件下反应10min。
试剂四	10	10	10
立即混匀，25℃条件下孵育2min，在412nm波长读取吸光度A，ΔA=A空白管-A测定管。

【注】：第一步反应时，孵育10min即可，如测定管与空白管测值非常接近，说明酶活性较低，可以适当增加孵育时间至30min或增加样本量（试剂一的加入量相应减少）。

文献引用格式

总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒 (Boster Biological Technology, Wuhan, China. Catalog#SH3020）

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